PCR用DNA聚合酶的特性，實現(xiàn)了DNA片段的體外指數(shù)級擴增。而qPCR則在此基礎上引入了熒光探針或染料，實現(xiàn)了對擴增產物的實時監(jiān)測和定量分析。接下來一起來了解下兩種技術背后的原理及應用差異。
PCR和qPCR區(qū)別
PCR
聚合酶鏈式反應（PCR）是一種基礎生物分子學技術，用于在體外大量擴增特定的DNA片段。其原理是通過溫度循環(huán)（預變性——用于激活熱啟動酶和確保模板DNA完全變性、變性、退火、延伸）等步驟，經過多次循環(huán)使DNA聚合酶催化合成新的DNA鏈。
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定量能力：PCR主要關注目標DNA序列的擴增，而不直接提供擴增產物的定量信息。
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應用：PCR應用領域包括基因克隆、遺傳病診斷、法醫(yī)鑒定、基因表達研究的初步篩查等行業(yè)。
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結果分析：通過凝膠電泳來觀察擴增產物，根據(jù)產物條帶的大小和亮度判斷是否存在目標序列，但無法精確測量其量。
qPCR
實時定量聚合酶鏈式反應(qPCR)是在PCR基礎上添加了熒光檢測系統(tǒng)，如實驗中?？吹降臒晒馓结樆驘晒馊玖?，能夠在實驗擴增中實時監(jiān)測熒光信號變化，從而實現(xiàn)對DNA或cDNA拷貝數(shù)的定量分析。
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高敏感度和精確度：由于能夠實時檢測擴增過程，qPCR可以提供目標序列精確濃度信息，定量范圍更廣，靈敏度和精確度也遠高于傳統(tǒng)PCR。非常適合低拷貝數(shù)DNA的檢測和基因表達水平的精確測量。
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應用：qPCR應用領域包括基因表達分析、病原體定量、疾病診斷、藥物篩選等領域，尤其在需要精確測量基因表達變化的研究中至關重要。
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結果分析：通過擴增曲線和熔解曲線分析，不僅能夠定量，還能評估擴增的特異性。熔解曲線的峰形和峰值溫度可以反映PCR產物的特異性，例如，單一的尖銳峰形通常表示產物特異性高，而多個峰或寬峰則可能提示存在非特異性擴增或引物二聚體。
總而言之，PCR和qPCR都是強大的分子生物學工具，但它們在功能和應用上存在顯著差異。PCR主要用于DNA片段的擴增，而qPCR則更側重于DNA的定量分析。選擇哪種技術取決于具體的實驗目的和需求。如果只需要確定目標序列是否存在，那么PCR就足夠了；但如果需要精確測量目標序列的濃度或基因表達水平，那么qPCR則是更好的選擇。
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